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真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的,可以控制细胞分裂分化,调节细胞生长衰老的一类活性多糖。真菌多糖主要有香菇多糖、灵芝多糖、云芝多糖、银耳多糖、冬虫夏草多糖、茯苓多糖、金针菇多糖、黑木耳多糖等。
真菌多糖是一种具有发展前途的医疗保健资源。研究表明,香菇多糖、灵芝多糖、茯苓多糖等食药性真菌多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗突变、抗病毒、降血脂、降血糖、降血压、抗氧化等方面功能。
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真菌多糖加工技术
获得真菌多糖的方法有两种,一种是从栽培真菌子实体提取,另一种是发酵法短时间生产大量的真菌菌丝体,本文以香菇多糖为例,介绍两种真菌多糖加工技术。
一、提取法
工艺流程
鲜香菇→捣碎→浸渍→过滤→浓缩→乙醇沉淀→乙醇、乙醚洗涤→干燥→成品。
操作要点
①取香菇新鲜子实体,水洗干净,捣碎后加5倍量沸水浸渍8~15h,过滤,滤液减压浓缩。
②浓缩液加1倍量乙醇得沉淀物,过滤,滤液再加3倍量乙醇,得沉淀物。
③将沉淀加约20倍的水,搅拌均匀,在猛烈搅拌下,滴加0.2mol/L氢氧化十六烷基三甲基胺水溶液,逐步调至pH12.8时产生大量沉淀,离心,沉淀用乙醇洗涤,收集沉淀。
④沉淀用氯仿、正丁醇去蛋白,水层加3倍量乙醇沉淀,收集沉淀。
⑤沉淀依次用甲醇、乙醚洗涤,置真空干燥器干燥,即为香菇多糖。
二、深层发酵法
工艺流程
菌种→斜面培养→一级种子培养→二级种子培养→深层发酵→发酵液。
操作要点
①斜面培养:在土豆琼脂培养基接菌种,25℃培养10天左右,至白色菌丝体长满斜面,0~4℃冰箱保存备用。
②摇瓶培养:500mL三角瓶盛培养液150mL左右,0.12kPa蒸汽压力下灭菌45min。当温度达到30℃时,接斜面菌种,置旋转摇床(230r/min),25℃培养5~8天。
培养液配方(g/100mL):蔗糖4,玉米淀粉2,硝酸铵0.2,磷酸氢钾0.1,硫酸镁0.05,维生素B10.001。pH值6.0。
③种子罐培养:培养液同前,装量70%(体积分数),接入摇瓶菌种,菌种量10%(体积分数),25℃,通气比1:0.5~1:0.7V/(V·min)培养5~7天。
④发酵罐培养
a.配料与接种:发酵罐先灭菌。罐内配料,培养液配方同前。配料灭菌,0.12kPa灭菌50~60min。冷却后,以压差法将二级菌种注人发酵罐,接种量10%(体积分数),装液量70%(体积分数)。
b.发酵控制:发酵温度22~28℃,通气比1:0.4~1:0.6V/(V·min),罐压0.05~0.07kPa,搅拌速度70r/min;发酵周期5~7天。
c.放罐标准:发酵液pH值降至3.5,镜检菌丝体开始老化,即部分菌丝体的原生质出现凝集现象,中有空泡,菌丝体开始自溶,也可发现有新生、完整的多分枝的菌丝;上清液由浑浊状变为澄清透明的淡黄色;发酵液有悦人的清香,无杂菌污染。
发酵液中多糖的提取
香菇发酵液由菌丝体和上清液两部分组成,胞内多糖含于菌丝体,胞外多糖含于上清液。因此多糖提取要分上清液和菌丝体两部分来完成。
①上清液胞外多糖的提取
a.工艺流程:发酵液→离心→发酵上清液→浓缩→透析→浓缩→离心→上清液→乙醇沉淀→沉淀物→丙酮、乙醚洗涤→干燥→胞外粗多糖。
b.操作步骤:离心沉淀,分离发酵液中菌丝体和上清液。上清液在不大于90℃条件下浓缩至原体积的五分之一。上清浓缩液置透析袋中,于流水中透析至透析液无还原糖为止。透析液浓缩为原浓缩液体积,离心除去不溶物,将上清液冷却至室温。加3倍预冷至5℃的95%乙醇,5~10℃下静置12h以上,沉淀粗多糖。沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后,真空抽干,然后置于干燥器中进一步干燥,得胞外粗多糖干品。
②菌丝体胞内多糖的提取
a.工艺流程:发酵液→离心→菌丝体→干燥一→菌丝体干粉→抽提→浓缩一→离心→上清液一→透析→浓缩→离心→上清液→沉淀物→丙酮、乙醚洗涤→干燥→胞内粗多糖。
b.操作要点:菌丝体在60℃干燥,粉碎,过80目筛。菌丝体干粉水煮抽提三次,总水量与干粉重之比为50:1100:1。提取液在不大于90℃下浓缩至原体积的五分之一。其余步骤同上清液胞外提取。